Muuseumiööl on külastajatel võimalik osa saada kümnetest eriilmelistest üritustest üle Eesti: toimuvad etendused, mängud, lugemised, töö- ja jututoad, kontserdid, korraldatakse temaatilisi ekskursioone.

Üheks eriatraktsiooniks on T-lood: Eesti kirjanike lühipalad, mida saab kuulata mobiiltelefonipõhises audiogiidis Regio T-numbri platvormil. T-lugusid loevad Indrek Hirv, Andrus Kivirähk, Jaan Kaplinski, Kauksi Ülle, Aidi Vallik, Arne Ruben, Contra ja kümned teised kirjanikud.

Uutest muuseumidest osalevad muuseumiööl näiteks Trükimuuseum Tartus ning Nukumuuseum ja Muuseum Miia-Milla-Manda Tallinnas. Samuti osalevad muuseumiööl esmakordselt Eesti Sõjamuuseum Viimsis, Kihnu muuseum, Tartu Ülikooli Kunstimuuseum, Liivi muuseum ning Kolkja vene vanausuliste muuseum.

Tallinnas osalevad muuseumiööl lisaks muuseumidele ka riigiarhiiv, kunstihoone ning kesklinna ajaloolised luteri kirikud, kus samuti toimuvad ringkäigud ning kontserdid. Tallinnas sõidab muuseumide vahel tasuta muuseumiöö buss.

Eesti muuseumiöö on osa üle-euroopalisest muuseumiööst, mida korraldatakse juba kuuendat korda.